5种天然植物提取物中4种多环芳烃的HPLC—FLR测定方法（一） 测定天然植物提取物种类繁多

天然植物提取物是种天中种指采用一定的溶剂和方法，以植物(植物全部或者某一部分)为原料，然植经过提取、物提分离、取物纯化过程，多环的得到的芳烃方法活性成分(如酚酸、黄酮、测定精油、种天中种生物碱、然植多糖等)…，物提具有含量稳定、取物无污染、多环的无残留、芳烃方法易吸收等优点。测定天然植物提取物种类繁多，种天中种来源广泛，具有抗氧化、抗肿瘤、抗癌等作用。如：天然叶黄素目前主要来源于万寿菊，不仅使用效果较好，且能有效对人们慢性疾病予以防治，尤其是在保护视力以及增强免疫力方面，具有非常显著的应用效果；天然番茄红素目前主要来源于茄科植物西红柿，是一种很强的抗氧化剂，具有较强的消除自由基的能力，还具有防癌、抗癌、预防心脑血管等疾病，美容祛皱等功效，有“植物黄金”之称；葡萄籽中富含原花青素及抗癌物白藜芦醇，其中多酚含量在95％以上；咖啡豆中除含有挥发性物质外，还含有多酚类化合物…，绿原酸作为其中主要的活性成分，具有抗病毒…、抗氧化活性，还可以降低患有自发性高血压鼠和人的血压；姜黄提取物姜黄素类物质具有降血脂、抗凝、抗氧化、利胆、抗癌等作用。因此，随着人民生活水平的提高和健康意识的增强，天然植物提取物的使用范围日益广泛，市场需求量日益增加，目前，天然植物提取物已被广泛应用于食品添加剂、食品保鲜、养殖业、农药杀虫剂、医药等领域。

多环芳烃(PAHs)是广泛存在于环境中的一种持久性有机污染物，具有很强的致畸、致突变、致癌性，由于性质稳定、难于降解，PAHs在空气、水体、土壤中呈不断积累的趋势，并主要通过根部吸收和植物叶片吸收，进入植物体内。在植物提取加工过程中，植物体内多环芳烃随有机溶剂迁移至天然植物提取物中，严重影响天然植物提取物行业的健康发展。我国强制性食品安全标准GB 2762—2017《食品安全国家标准食品中污染物限量》中单纯以苯并［α］芘含量为评价指标，而欧盟委员会835／2011号文件规定了食品中PAHs污染的另一个评价指标为PAH4苯并［α］蒽(BaA)，苯并［α］荧蒽(BbF)，苯并［α］芘(BαP)的总含量，相较于欧盟以PAH4的总含量作为评价指标而言，我国单纯以BαP的含量作为评价指标得出的结果较为片面。因此，研究能够快速同时测定PAH4总含量的方法具有重要意义。

目前，关于多环芳烃的检测方法主要包括气相色谱法、气相色谱一质谱联用法、气相色谱一三重四级杆串联质谱法和高效液相色谱法等，检测对象主要是环境、空气、土壤、水体、植物油等，尚未见关于天然植物提取物中多环芳烃检测方法的文献报道，由于天然植物提取物基质复杂，有关多环芳烃检测的标准方法及文献方法不能直接应用，如何准确测定天然植物提取物中多环芳烃，是亟需解决的问题。本文采用高效液相色谱法检测5种天然植物提取物中4种多环芳烃，方法对天然植物提取物适用性强，检测准确性高，对天然植物提取物的质量控制具有十分重要的意义。

一、材料与方法

1、材料与试剂

丙酮(色谱纯，美国SR)；甲醇(色谱纯，美国SR)；正己烷(色谱纯，美国SR)；二氯甲烷(色谱纯，美国SR)；乙醇(色谱纯，美国SR)；乙腈(色谱纯，美国SR)；环己烷(分析纯，天津市永大化学试剂有限公司)；乙酸乙酯(分析纯，天津市永大化学试剂有限公司)；超纯水(18．2MΩ，实验室纯水机自制)；16种多环芳烃标准品混标(200μg/mL，o2si)、多环芳烃固相萃取柱(SPE)(500mg，6mL，上海安谱实验科技股份有限公司)。

2、仪器与设备

Waters E2695高效液相色谱仪，配备2475荧光检测器；济宁天华超声电子仪器有限公司TH一600型超声波清洗器；岛津制作所AUY220型分析天平；大龙兴创实验仪器(北京)有限公司Mx—S型漩涡混合器；天津泰斯特仪器有限公司DK一98一IIA型电热恒温水浴锅；长沙湘仪离心机仪器有限公司H一2050R型高速冷冻离心机；北京莱伯泰科仪器有限公司GPC800一Vonex型凝胶渗透色谱仪；上海申生科技有限公司R213B型旋转蒸发仪。

3、色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse PAH C18(4.6×250mm，5μm)；柱温：40℃；检测波长：淈：激发波长270nm，发射波长385m；苯并(b)荧蒽、苯并(a)蒽、苯并(a)芘：激发波长288nm，发射波长430nm；进样量：100μL；流速：1.5mL／min；运行时间：40min；流动相A：水；流动相B：乙腈。

4、前处理方法

（1）万寿菊提取物

精确称取0.19万寿菊提取物样品(精确至0.00019)于25mL容量瓶中，用玻璃移液管加入2mL色谱纯丙酮促溶，涡旋使其混合均匀后，加入GPC流动相定容，摇晃混合均匀，超声溶解。使用玻璃注射器，用0.22um滤膜过滤至GPC进样管中，经GPC净化。

收集液使用旋转蒸发仪浓缩至近干，氮气吹干，用2mL 88％乙腈水溶液准确定容，超声溶解，样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜，装小瓶进样检测。

（2）番茄提取物

精确称取0.2～0.39番茄提取物样品(精确至0.00019)于25mL具塞玻璃试管中，用玻璃移液管加入2mL色谱纯二氯甲烷促溶，涡旋使其混合均匀后，加入GPC流动相定容，摇晃混合均匀，在40℃以上的超声波清洗机中超声提取30min。在3500r／min、5℃条件下离心5min。使用玻璃注射器，用0.22μm滤膜过滤至GPC进样管中，经GPC净化。

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